大鼠骨髓单核细胞 新品

细胞简介：

大鼠骨髓单核细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓单核细胞是一种未成熟的单核细胞，在骨髓细胞中约占0.04%，被认为是破骨细胞的前体细胞，较外周血单个核细胞诱导的破骨细胞得率高、全骨髓诱导法产生的破骨细胞数量多，纯度高，较脾细胞诱导法分化效率高。骨髓单核细胞(BMMNCs)是从股骨或胫骨骨髓中分离提取出来的原代细胞，它属干细胞类型。目前，大多数研究用淋巴细胞分离液分离提取骨髓单核细胞，最近也有采用免疫磁珠分离法分离骨髓单核细胞。

产品信息：

方法简介：实验室分离的大鼠骨髓单核细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠骨髓单核细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：大鼠骨髓单核细胞

组织来源：骨髓

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：巨噬细胞样

传代特性：不增殖；不传代

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠骨髓单核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养指南：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

复苏的原则

快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
通用注意事项：

无菌操作：所有操作全程在超净台内进行，定期对超净台、培养箱进行消毒，使用无菌的培养基、血清、试剂

细胞状态监测：每天观察细胞形态、密度、颜色变化，记录生长情况，若发现细胞出现污染、形态异常、生长缓慢等问题，及时处理

培养基更换：原代细胞培养初期每2-3天更换一次培养基，传代后每1-2天更换一次，根据培养基颜色变化（变黄表示营养耗尽）灵活调整

避免过度操作：原代细胞较为脆弱，避免频繁吹打、离心，尽量减少对细胞的机械损伤

冻存备份：原代细胞分离成功后，及时冻存部分细胞作为备份，冻存液使用90%血清+10%DMSO，采用梯度降温法冻存

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