大鼠肠巨噬细胞

大鼠肠巨噬细胞

从Sprague-Dawley大鼠肠巨噬细胞组织标本经机械研磨与胶原酶消化获取单细胞悬液，通过 Ficoll-Paque 密度梯度离心分离淋巴细胞层，经红细胞裂解液处理后再悬浮于含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，添加特异性细胞因子（如 IL-2 维持 T 细胞活性、IL-4 诱导 M2 极化）进行体外培养；通过免疫荧光染色检测 CD68、CD163（巨噬细胞极化标志）、CD3/CD4/CD8（T细胞标志）表达，并经功能实验（细胞毒性 assay、cytokine release ass⯆⯆

产品名称：大鼠肠巨噬细胞

英文名称： Rat Intestinal Macrophages

组织来源： 全肠组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肠巨噬细胞采用酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肠巨噬细胞经F4/80免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肠巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 巨噬细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

大鼠肠巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：RPMI1640 完全培养基、胶原酶 IV、红细胞裂解液、PBS、双抗。

2. 耗材：研磨棒、细胞筛、离心管，无菌取材器械。

二、取材与预处理

1. 摘取大鼠小肠结肠，剪开冲洗肠内容物，剪碎肠壁组织。

2. PBS 充分洗涤组织碎片，去除黏液与粪便残渣。

三、细胞分离与消化

1. 胶原酶 IV 37℃振荡消化 45min，吹打过滤制成单细胞悬液。

2. 裂解红细胞，离心洗涤细胞悬液 2 次。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液贴壁培养 2h，倒掉悬浮淋巴细胞，贴壁细胞即为肠巨噬细胞。

2. RPMI 完全培养基维持培养，隔天换液。

1.目标组织取材后迅速置于含青霉素-链霉素的Hanks液中运输，尽快分离平滑肌组织块。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.培养基中添加20%胎牛血清和10ng/ml血小板衍生生长因子(PDGF)可显著促进平滑肌细胞增殖。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。