NF-κB p65 大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒

检测原理：

1、预包被板上固定有NF-κB p65 大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽特异性捕获抗体。

2、样本中的NF-κB与包被抗体结合，再加入酶标检测抗体形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”三明治复合物。

3、加入HRP底物液发生显色反应，颜色深浅与样本中NF-κB含量成正比。

4、终止反应后在450nm波长下读取吸光度值，通过标准曲线即可精准计算样本中NF-κB的浓度。

产品名称：NF-κB p65 大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒

英文名称：NF-κB ELISA Kit

产品货号：BKE7122

检测种属：大鼠

检测类型：双抗体夹心法测抗原

规格：96T/48T

存储条件：2-8℃避光密封保存

有效期：6个月

可测样本类型：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等

常见规格与保存：

产品规格：常见的有48T和96T两种规格，分别可进行48个或96个样本的检测。

样本类型：适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。

保存条件：通常在2-8℃条件下避光保存。

有效期：一般为6个月。

ELISA试剂盒的局限性与缺点：

1. 操作步骤繁琐，对操作要求高

流程长：典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤，耗时较长（通常需要3-5小时甚至过夜）。

洗涤关键：洗涤步骤至关重要，洗板不彻底会导致背景值过高（假阳性），洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。

2. 易受干扰与“钩状效应”

钩状效应 (Hook Effect)：当样本中目标抗原浓度极高时，可能会饱和捕获抗体和检测抗体，导致信号反而下降，出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。

基质干扰：样本中的杂质（如溶血、脂血、类风湿因子等）可能会干扰抗原抗体结合，导致结果偏差。

交叉反应：虽然特异性较高，但如果抗体质量不佳，仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。

3. 仅检测抗原含量，信息有限

ELISA只能告诉你“有多少”抗原，无法提供关于抗原的生物活性（是否具有功能）或结构完整性的信息。例如，变性的蛋白可能仍能被ELISA检测，但已失去生物活性。

4. 试剂成本与稳定性

试剂成本：高质量的抗体（尤其是配对良好的单抗）制备工艺复杂，导致试剂盒成本相对较高。

酶的不稳定性：酶标记物对温度和环境敏感，若保存不当容易失活，影响实验结果。

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注意事项：

样本要求：溶血的标本会影响检测结果，不宜使用。待测样本应尽早检测，如需保存，应在-20℃或-80℃冷冻，并避免反复冻融。

试剂准备：使用前需将所有试剂置于室温（20-25℃）平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出，需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。

操作规范：

为避免交叉污染，添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。

底物显色液应呈无色或很浅的颜色，若已变蓝则不能使用。

洗板步骤对结果准确性至关重要，无论是手动还是自动洗板，都应确保洗涤充分，并避免微孔在温育过程中干燥。

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。