大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，固相载体包被大鼠NF-κB特异性抗体，样本中的核因子κB抗原与包被抗体特异性结合，结合酶标记抗体后催化底物显色，吸光度与样本NF-κB浓度正相关，通过标准曲线完成精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL～8ng/mL

反应时间：总实验时长90min，样本孵育60min，显色15min，终止读数5min

保存条件：2～8℃避光密封保存，严禁冷冻

有效期：未开封有效期6个月，开封后1个月内用完

显色系统：TMB双组分显色系统，过氧化物酶催化显色

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，线性相关系数R²≥0.990

特异性：特异性识别大鼠NF-κB蛋白，与大鼠其他同源核转录因子无交叉反应，与小鼠、兔等异种属蛋白交叉反应率＜5%

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%

注意事项：实验全程避免强光直射与高温环境；样本需避免反复冻融，离心去除杂质后检测；显色时间需严格把控，避免过显色或显色不足；所有试剂使用前需平衡至室温。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 32min，复溶 NF-κB 总蛋白标准品设置浓度梯度，划分酶标板孔型。

直接加样：标准孔加梯度标准液 100μL，待测孔加大鼠细胞核提取液 100μL，空白孔加稀释液。

覆膜密封酶标板，37℃孵育 75min，捕获核转录因子 NF-κB。

弃净孔内液体，洗涤液加满每孔静置 36s，洗板 5 次，倒扣拍干残留洗液。

非空白孔加入酶联抗体工作液 100μL，避光 37℃孵育 34min。

加入显色底物混合液 100μL，轻摇混匀，37℃避光显色 17min。

终止液终止显色，450nm 测 OD 值，拟合标准曲线得到 NF-κB 浓度。