LAD2人肥大细胞

名称

LAD2人肥大细胞，能够释放组胺（脱粒）

别称

LAD2; LAD-2; Laboratory of Allergic Diseases 2

年龄（性别）

44岁，男性，肥大细胞增多症

组织来源

骨髓

生长特性

悬浮生长

细胞形态

圆形、颗粒状；部分高密度大聚集体

细胞来源

美国国立卫生研究院 (NIAID)

生物安全等级

BSL-2

完全培养基组分

100 ng/mL人类干细胞因子(SCF)+2 mM L‑谷氨酰胺＋1% P/S，但建议用专用培养基

培养条件

气相：95%空气+5% CO₂；温度：37℃

培养方式

悬浮培养；每周用等体积新鲜培养基更换一半培养基。不要让细胞过度汇合，细胞密度不要超过1×10⁶个细胞/mL。

群体倍增时间

初期生长缓慢；最优条件下2-4周完成倍增。

传代操作

1. 扩增容器：T75或更大培养瓶；维持细胞密度5×10⁵‑8×10⁵细胞/mL，最高不超过1×10⁶细胞/mL。

2. 传代操作方案（两种）：

方案1（半换液法）：复苏后1‑2周，吸取一半旧培养基，补入同等体积新鲜完全培养基；尽可能撇除碎片。复苏早期2‑3周细胞死亡增加属于正常。

方案2（离心分瓶法）：收集全部细胞，850 rpm离心5 min，弃去一半上清，沉淀重悬剩余上清，按1:1加入新鲜完全培养基，分装至新培养容器。

提醒：不建议完全更换全部培养基。

冻存条件

储存条件：液氮气相，或低于-130 ℃。

冻存液配方：无血清细胞冻存液。

背景简介

1. LAD2人类肥大细胞系源自肥大细胞肉瘤/白血病患者的骨髓抽吸物。这些细胞表现出人类肥大细胞的超微结构特征，并表达 FCεRI以及CD4、9、13、14、22、31、32、45、64、71、103、117、132、CXCR4 (CD184)和CCR5 (CD195)等标记物。此外，它们还含有胞质内组胺、类胰蛋白酶和食糜酶。值得注意的是，LAD2细胞在C‑KIT基因的密码子816处不携带激活突变。与LAD1类似，LAD2细胞在FCεRI或FCγRI聚集时释放Β‑己糖胺酶。

2. LAD2细胞系由肥大细胞白血病患者的骨髓样本经体外培养并永生化建立。肥大细胞白血病是一种罕见的造血系统恶性肿瘤，以异常肥大细胞在骨髓和外周血中大量增殖为特征。因此，LAD2细胞保留了肥大细胞的主要生物学特性，包括表达高亲和力IgE受体（FcεRI）以及释放组胺等介质的能力，常被用于肥大细胞相关的免疫学、炎症反应及过敏机制研究。与另一种常用的人肥大细胞系HMC-1相比，LAD2细胞在表型和功能上更接近正常肥大细胞，因而在模拟生理或病理状态下的肥大细胞行为方面具有一定优势。

功能与应用

1. 能够释放组胺（脱粒）

2. 表达标志物：FCεRI、CD33、CD34、CD63、CD117、CD133、CD193

3. 传代比例：首次传代建议 1:2

4. 接种密度：5×10⁵ - 8×10⁵细胞/mL

注意事项

1. 解冻后的前两周观察到细胞死亡属于正常现象，置于推荐条件等待细胞恢复。

2. 细胞生长缓慢，对支原体污染极其敏感，需要定期支原体检测。

3. 长期连续培养后细胞可能会丧失功能；必须每2个月进行一次脱粒试验验证细胞功能。为了获得最佳脱粒效果，在致敏前应将100万个LAD2和LADR细胞在不含HSCF的培养基中培养4小时。然后用人IgE致敏细胞，然后进行IgE交联以刺激脱颗粒，然后再进行肥大颗粒化验。

4. 收到冻存细胞，尽快转移至-130 ℃以下，优先液氮气相环境 保存，等待复苏。

5. 建议收到后尽快复苏培养；禁止-70 ℃长期存放，会造成细胞活力大幅下降。

细胞运输

干冰冻存运输（1mL冻存管，+250元干冰费）