佰莱博生物BLI 生物膜干涉技术分子互作实验服务

佰莱博生物BLI 生物膜干涉技术分子互作实验服务

佰莱博生物致力于提供专业的生物膜干涉BLI检测服务，公司拥有6年BLI实验服务经验，已完成2000+靶点蛋白检测，涵盖广泛的检测领域，包括：蛋白质与药物、蛋白质与小分化合物、蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸、蛋白质与多糖等分子间相互作用亲和力分析，以及抗体筛选、抗体表征等BLI实验服务。我们以BLI技术全球领先设备品牌赛多利斯公司的  ForteBio Octet red 96e、Octet R8型BLI设备为核心，结合专业的技术团队，为每一位客户量身定制一对一的专业BLI生物膜干涉亲和力检测实验服务，满足大学、医院、科研院所及生物制药企业对BLI等生物分子互作分析的需求。

检测原理 — 生物膜干涉技术（Bio-Layer Interferometry，BLI）

       生物层干涉（BLI）是一种非标记技术，它将发生在 BLI生物传感器表面的光干涉信号转化为实时的响应信号。通过对分子结合过程的实时监测，系统会测定结合常数（ka或 kon）和解离常数（kd 或 koff），并通过拟合计算分析得到亲和力（KD）和浓度信息。

图1. BLI 生物传感器剖面图

BLI 技术所用生物传感器（探头）由玻璃光纤制成，并在玻璃光纤的末端外加了特殊的光学层。该光学层为固定配体提供了表面化学基质（图1）。白光（包括可见光谱中的所有波长）被引入玻璃光纤中，并在顶端的两个界面处产生部分内部反射：（1）玻璃光纤和光学层之间（恒定）的界面；（2）表面化学和溶液（可变）接触的界面（图 2A）。这两个界面产生的两路反射光会引发光干涉现象（图 2B），仪器会对每个波长的干涉光强度予以测量记录，并生成干涉光谱曲线（图2C）。经历相长干涉的波长在光谱曲线上显示为高振幅，而经历相消干涉的波长则显示为低振幅。BLI分子相互作用分析仪就是通过实时测量干涉光谱曲线的变化，以实现检测分子间相互作用的目的。

图 2. BLI技术原理

当分子与固定在生物传感器表面上的配体结合时，引起光学层的厚度增加，第二路反射光的路径长度比之前更长（图 2D）。这导致干涉光谱曲线发生改变，并向右产生位移。当分子和配体解离时，分子会从生物传感器表面解离到溶液中，这将导致干涉光谱曲线向左移动。以干涉光谱曲线的偏移距离（以nm为单位）与反应发生时间绘制的关系图被称为传感图（Sensorgram）。通过传感图，可在各种结合模型的基础上拟合出ka，kd 和KD（图3）的数值。

图3. 将BLI 干涉图谱信号转换为传感图

BLI 动力学检测实验流程

下图展示了 ForteBio Octet red 96e仪器上测定结合动力学的标准流程。探头提供多种化学界面，无需修饰即可快速固定配体。可以同时平行检测多对结合反应，缩短实验运行时间，例如抗体筛选，表位分类，实验条件优化，浓度梯度依赖性结合分析等。

图 4. 使用BLI进行典型的结合动力学分析的工作流程

BLI定量实验流程

BLI 技术可用于定量分子的浓度，例如 IgG、Fc- 融合蛋白、人 Fab、含 HIS 标签或 GST- 融合重组蛋白。生物传感器可在几分钟内确定纯化后或粗制样品中特定分析物的浓度。由分析物与生物传感器结合产生的结合曲线，其结合速率与分析物浓度是有相关性的（图5）。佰莱博生物提供针对检测 Protein A、HCP 残留、唾液酸含量以及甘露糖含量的标准服务，也可以根据客户的样本情况开发针对性的实验服务。

（图5）典型的 BLI 定量分析数据集。根据原始结合曲线（A）计算标准品的结合速率，并绘制在已知标准曲线（B）上，得出样品中的蛋白质浓度。

实验服务项目：

抗体及抗体片段鉴定：

l  检测抗原-抗体间结合的Ka,Kd和KD

l  粗制上清样品的亲和力排序及解离速率排序

l  抗体工程及亲和力成熟

蛋白与蛋白相互作用、蛋白与多肽相互作用：

l  构效关系及作用机理研究

l  结构异构体动力学分析

l  野生型和突变体功能分析

蛋白与DNA相互作用 、蛋白与RNA相互作用：

l  转录因子相互作用分析

l  RNA结合蛋白介导的RNA调控

l  翻译调控机理

蛋白与脂类相互作用：

l  蛋白与脂质体相互作用

l  膜蛋白动力学分析

病毒及疫苗研究：

l  HIV包膜蛋白研究

l  病毒结合选择性地进化

l  病毒抗体的研发

蛋白与小分子化合物相互作用：

l  非标记检测，分子量检测下限150Da

l  包括Ka,Kd和KD的结合参数

l  快速的化合物库筛选

免疫原性分析

桥连法或直接法测定高亲和力和低亲和力抗药抗体（ADA）

残留蛋白A检测

用于蛋白A及其生物类似物如MabSelect SuRe测定

CHO宿主细胞蛋白检测

快速、高通量检测CHO宿主细胞蛋白残留

BLI技术应用案例

应用一：分子间竞争性结合分析

应用二：药物与靶蛋白结合

应用三：小分子药物筛选及验证

(A) 用BLI单浓度筛选KK-LC-1抑制剂（145个）；（B） 用BLI 进行Z8的多浓度亲和力测定，亲和力为4.3μM；（C） Z8的分子结构

应用四：抗原与抗体亲和力分析

用Anti-human Fc传感器固化抗体，分别与EGFR（左图），NKp30（中图）进行结合解离检测其亲和力。然后通过连续结合两个靶点，观察抗体是否可以同时结合两个抗原（右图）。

应用五：蛋白与蛋白互作

用SA传感器固化生物素化的ALKALs，与LTK和ALK以及其突变体互作。与野生型相比，突变体的亲和力降低或者消失。证明了结构解析的结果。

服务流程

常见的生物分子间的亲和力值范围

? 亲和素-生物素结合： 10^?14 M

? 强的抗原-抗体结合： 10^?8~10^?10 M

? DNA与蛋白的结合： 10^?8~10^?10 M

? 较弱的抗原-抗体结合： 10^?6~10^-7 M

? 酶与底物结合： 10^?4~10^?10 M

? 蛋白与小分子结合： 10^?3~10^?6 M

佰莱博生物BLI检测服务的优势：

• 设备先进：Octet? R8、Octet red 96e等领先机型，原厂耗材

• 团队专业：6年经验资深分子互作实验团队，2000+靶点蛋白实验经验

• 检测类型：亲和力测定、竞争结合、抗体筛选、表位作图、浓度分析

• 数据可靠：多维度优化确保高质量检测数据

• 服务高效：一对一服务，最快48小时交付结果

在提供一流的生物膜干涉技术（BLI）分子互作检测服务的同时，佰莱博生物还提供全方位的生物分子相互作用检测服务，涵盖生物物理、生物化学、细胞生物学以及计算机模拟等多个技术层面。具体服务内容如下：

生物物理技术：

SPR、MST、ITC、BLI、DSF、CETSA、nanoDSF、MALS （动静态光散射）、AUC （分析型超离）、CD （圆二色光谱

生物化学技术：

Small Pull-Down、GST Pull-Down、Co-IP 、DARTS

细胞生物学技术：

小分子免疫荧光（小分子荧光共定位）

计算模拟技术：

虚拟筛选、分子对接、分子动力学模拟、基于AI的蛋白质设计