T3 RNA聚合酶

产品简介

T3 RNA聚合酶来源于 T3 噬菌体，重组表达纯化得到；DNA 依赖的 RNA 聚合酶，识别 T3 噬菌体特异性启动子序列，以 DNA 为模板催化核糖核苷三磷酸合成 RNA 转录本。主要用于体外转录、RNA 合成、探针制备、sgRNA 合成、体外 RNA 功能实验。仅限体外科研，不可临床诊断。

技术参数

1. 来源：重组大肠杆菌表达纯化

2. 性状：透明至微淡黄色甘油酶液

3. 活性单位定义：37℃条件下，1 小时催化合成 1 nmol RNA 所需酶量定义为 1U

4. 储存缓冲：含 50% 甘油的酶储存缓冲液，含盐、稳定剂；无 DNase、无 RNase、无蛋白酶污染

5. 识别启动子：T3 特异性启动子序列

6. 反应温度：37℃为最适温度

储存条件

- 酶原液：‑20℃保存，严禁‑80℃冻存，冻结会造成酶活性不可逆丧失；有效期 12 个月。

- 不要反复多次温度波动；取用置于冰上操作。

标准体外转录反应参考

1. 反应体系组分：DNA 模板（带有 T3 启动子）、ATP/UTP/GTP/CTP NTP 混合物、DTT、T3 转录缓冲液、T3 RNA 聚合酶，补无 RNase 水至体系。

2. 37℃孵育 1‑4h 完成转录；后续可使用 DNase I 去除 DNA 模板。

3. 全部耗材、枪头、离心管必须无 RNase 污染。

使用注意事项

1. 酶含 50% 甘油，禁止冷冻结冰，结冰直接失活；全程冰上操作。

2. RNase 极易造成 RNA 降解，严格控制环境无 RNase。

3. DTT 易氧化，反应缓冲建议现配或分装保存。

4. 模板 DNA 必须下游带有正确 T3 启动子，否则无法转录。

5. 避免酶在室温长时间放置，用完立刻放回‑20℃。

6. 本品仅体外生化实验，不可用于临床诊断。

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