糖原合成酶(GCS)测试盒

糖原合成酶(GCS)测试盒

产品介绍：

GCS（EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷键相连延长糖链，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰岛素作用的主要靶酶，对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

测定原理：

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映GCS活性。

需自备的仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

核心反应原理：糖原链延伸‑偶联检测：糖原合成酶以 UDP‑葡萄糖为葡萄糖供体，将葡萄糖残基添加至原有糖原引物链，释放 UDP；UDP 再经偶联反应生成 NADH。

靶标反应路径：UDP‑Glc + (糖原)ₙ \(\xrightarrow{GCS}\) (糖原)ₙ₊₁ + UDP；UDP 经丙酮酸激酶‑LDH 偶联产生 NADH 信号。

吸光信号来源：NADH 在 340 nm 吸光度上升；上升速率等于糖原合成速度。

定量计算原理：测定单位时间 340nm 吸光增量；换算出糖原合成酶催化活性。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定