糖原合成酶(GCS)测定试剂盒/微量法/96样

糖原合成酶(GCS)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

GCS（EC 2.4.1.11 ）催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UTP ，以 α-1 ，4-糖苷键相连延长糖链，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰岛素作用的主要靶酶，对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

测定原理：

GCS 催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UDP ，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化 NADH 氧化生成 NAD+ ，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 GCS 活性。

自备仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3 、 试剂五的配制：临用前在试剂五中加入 1mL 试剂二充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

4 、 将工作液和试剂五置于 37℃预热 5 分钟。

5 、 在 1mL 微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂五和 180μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。