乳酸含量(LA)测试盒

商品属性：

商品介绍：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量

代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成 NADH 和 H

+，H

+传递给 PMS

生成的 PMSH2还原 INT 生成红色物质，在 530nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
检测原理：

核心反应原理：乳酸脱氢酶氧化法：LDH 催化乳酸氧化生成丙酮酸，同时 NAD⁺被还原为 NADH；部分试剂盒搭配吩嗪甲基硫酸盐‑氯化硝基四氮唑蓝 (PMS‑NBT) 显色生成蓝紫色甲臜。

靶标反应路径：乳酸 + NAD⁺\(\xrightarrow{LDH}\)丙酮酸 + NADH + H⁺；NADH 传递电子给 NBT，还原生成有色甲臜产物。

吸光信号来源：甲臜产物在 530‑570 nm 可见光有最大吸收；或直接 340nm 测 NADH。

定量计算原理：乳酸标准曲线定量；空白管消除样本本底颜色干扰，换算乳酸含量。
样本前处理方法：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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测定操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定