果糖1,6二磷酸(FDP)测试盒

果糖1,6二磷酸(FDP)测试盒

产品介绍：

果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。

测定原理

醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

检测原理：

核心反应原理：酶偶联氧化还原法：FDP 在果糖二磷酸醛缩酶催化下裂解生成磷酸二羟丙酮与 3‑磷酸甘油醛；再经甘油‑3‑磷酸脱氢酶偶联消耗 NADH。

靶标反应路径：FDP→磷酸二羟丙酮 + 3‑磷酸甘油醛；磷酸二羟丙酮 + NADH → 甘油‑3‑磷酸 + NAD⁺。

吸光信号来源：NADH 于 340 nm 吸光，NADH 被氧化，A340 下降幅度与 FDP 含量成正比。

定量计算原理：设置 FDP 标准管，对比样本管、空白管吸光差值，计算样本内果糖‑1,6‑二磷酸浓度。
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操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定