人B细胞连接蛋白(BLNK)ELISA试剂盒

本试剂盒以双抗体夹心ELISA为核心原理，预先在酶标板微孔包被抗人BLNK捕获抗体，样本、标准品中的BLNK抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，随后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫复合物，洗板去除杂质后进行TMB底物显色，终止反应后测定吸光度，依据标准曲线计算样本中BLNK蛋白的含量。
基本参数‌：

产品名称：人B细胞连接蛋白(BLNK)ELISA试剂盒

英文名称：BLNK ELISA Kit
货号：Y-E2964

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出浓度0.18ng/mL，适配胞内信号连接蛋白微量检测

检测范围：0.5ng/mL - 16ng/mL，覆盖免疫细胞BLNK蛋白生理表达区间

反应时间：完整实验反应时长110分钟，保障信号蛋白抗原抗体充分结合

保存条件：酶标板、抗体试剂2-8℃冷藏，避光防潮保存

有效期：未开封有效期9个月，开封后密封冷藏可保存30天

特异性：专一识别人BLNK连接蛋白，无免疫信号通路同源蛋白交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，实验重复性符合科研标准

注意事项：样本采集后低温快速处理，防止信号蛋白降解，孵育过程保持环境平稳无震动
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

所有试剂室温回温 28min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 BLNK 标准品，对酶标板孔位进行分类标注。

标准品孔加入 50μL 梯度浓度标准液，待测孔加入 50μL 细胞裂解上清，空白孔补加稀释液。

全部孔位添加 100μL 一步法酶标记工作液，封板后 37℃避光孵育 50min。

倾倒废液，洗涤液浸泡洗板 5 次，单次浸泡 35s，洗板后彻底拍干。

每孔加入显色底物 90μL，37℃避光显色 16min。

滴加 50μL 终止液，摇晃酶标板混匀终止反应。

酶标仪 450nm 测定 OD 值，计算样本 BLNK 蛋白浓度。
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