大鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的大鼠组织蛋白酶K（cath-K）特异性抗体包被于酶标板微孔内，形成固相抗体；检测时样本、标准品中的cath-K抗原会与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标记的检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物，经底物显色液催化显色，显色深浅程度与样本中cath-K含量呈正相关，最终通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线即可精准计算样本中大鼠cath-K的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度可达0.1ng/mL，可精准识别样本中微量cath-K蛋白，无基线干扰。

检测范围：0.2ng/mL - 80ng/mL，覆盖大鼠组织、血清、细胞上清中cath-K常规表达浓度区间。

反应时间：整体实验操作时长90分钟，其中温育反应分两步，包被抗体结合30分钟，底物显色反应15分钟。

保存条件：试剂盒未开封组分2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后酶标板密封避光2-8℃存放。

有效期：未开封原装试剂盒有效期12个月，严格按储存条件保存可保证全程活性稳定。

特异性：仅特异性结合大鼠组织蛋白酶K，与大鼠其他组织蛋白酶家族成员无交叉反应，无种属外源蛋白干扰。

重复性：板内变异系数CV≤6%，板间变异系数CV≤8%，实验平行性与重复性良好。

注意事项：样本需避免反复冻融，溶血、脂血严重样本会干扰显色结果；实验全程避免强光直射，温育温度需严格控制在37℃。
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，配制洗涤液、样本稀释液、酶结合物工作液，取出所需板条，剩余板条密封冷藏保存。

设空白孔、标准品孔、待测样本孔，每孔先加入 50μL 对应稀释后标准品 / 待测样本，空白孔不加液体。

除空白孔外所有孔内直接加入 100μL 酶标记抗原工作液，封板膜密封酶标板。

恒温孵育箱 37℃避光孵育 60min，充分完成抗原抗体特异性结合反应。

撕去封板膜，弃去孔内液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，拍净孔内残留液体。

每孔依次加入显色剂 A 液 50μL、显色剂 B 液 50μL，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。

每孔加终止液 50μL 终止反应，15min 内使用酶标仪在 450nm 波长测定各孔 OD 值，根据标准曲线计算样本 cath-K 浓度。