大鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被大鼠FFA特异性捕获抗体，加入梯度标准品和大鼠待测生物样本，样本中的游离脂肪酸与固相抗体特异性免疫结合，洗涤去除未结合杂质，加入酶标记FFA检测抗体孵育形成免疫复合物，底物显色后，显色强度与样本中FFA含量呈正相关，结合吸光度值与标准曲线实现定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.01mmol/L

检测范围：0.02mmol/L - 2mmol/L

反应时间：全程110分钟（样本孵育50min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：2-8℃密封保存，避免油脂污染试剂

有效期：未开封储存有效期12个月

特异性：广谱识别大鼠各类游离脂肪酸，与甘油三酯、胆固醇无交叉干扰

重复性：板内变异系数CV≤4%，板间变异系数CV≤7%

注意事项：样本避免高脂污染，操作全程无油脂接触；试剂混匀轻柔，防止乳化；洗涤彻底，消除脂质残留干扰
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 30min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 FFA 标准品，酶标板编号区分空白、标准、待测样本。

标准品孔加入梯度游离脂肪酸标准品 50μL，样本孔加入 50μL 大鼠血浆上清液，空白孔不加试剂。

除空白孔外加入一步法酶标记抗体工作液 100μL，密封封板，37℃孵育 60min。

倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 40s 后甩干，循环洗板 5 次，去除非特异性结合物。

每孔加入显色液 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 13min。

加入终止液 50μL 终止酶反应，轻摇酶标板混匀。

450nm 波长测 OD 值，标准曲线法定量 FFA 含量。