大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒

本试剂盒采用高灵敏双抗体夹心ELISA技术，酶标板包被大鼠EPO特异性抗体，样本中的红细胞生成素抗原与包被抗体特异性结合，形成酶标免疫复合物后催化底物显色，吸光度与EPO浓度正相关，可精准检测大鼠样本中EPO的分泌水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.05mIU/mL

检测范围：0.1mIU/mL～20mIU/mL

反应时间：总时长105min，孵育75min，显色20min，读数5min

保存条件：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻，标准品需单独密封保存

有效期：未开封6个月，开封后1个月内有效

显色系统：高灵敏TMB显色系统，适配低浓度细胞因子检测

检测波长：450nm，630nm参比校准

标准曲线绘制：多梯度标准品拟合，四参数曲线，R²≥0.993

特异性：特异性识别大鼠EPO，与促血小板生成素等造血因子无交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：血液样本采集后及时分离血清，避免溶血；标准品现配现用，不可留存；显色全程避光操作。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 28min，梯度稀释 EPO 标准品，排布酶标板空白对照、标准梯度、大鼠血浆样本孔。

直接加样 100μL 标准品与稀释血浆样本至对应孔，空白孔加入等量稀释缓冲液。

覆膜封口，37℃恒温孵育 68min，固相捕获 EPO 激素抗原。

倒掉孔内废液，洗涤液注满每孔静置 29s，洗板 4 次，倒扣拍干残留洗液。

非空白孔加入酶联二抗工作液 100μL，避光 37℃孵育 25min。

加入显色底物液 100μL，避光轻微振荡，显色 13min。

终止液终止显色，450nm 测定 OD 值，对照标准曲线得出 EPO 含量。