大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，微孔板包被大鼠NF-κB p65特异性抗体，样本中的p65亚基抗原与包被抗体特异性吸附，经酶标记抗体显色放大信号后，检测吸光度数值，依据标准曲线精准定量大鼠样本中NF-κB p65的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.08ng/mL

检测范围：0.15ng/mL～6ng/mL

反应时间：总时长95min，样本孵育65min，显色15min，读数5min

保存条件：2～8℃避光保存，洗涤液可室温短期放置，其余试剂冷藏

有效期：未开封6个月，开盖后1个月内有效

显色系统：HRP催化TMB显色系统，蓝色显色，终止后转为黄色

检测波长：450nm，参比波长630nm

标准曲线绘制：8个梯度标准品检测，四参数拟合，线性拟合度R²≥0.990

特异性：精准识别大鼠NF-κB p65亚基，不与p50、p52等其他亚基发生交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：核蛋白样本需严格按照提取流程制备，避免蛋白变性；孵育温度恒定37℃，温度波动不超过±1℃；避免试剂交叉污染。
储存与有效期：

未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。

开封后保存

剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。

HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。

复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。

过期试剂禁止使用。

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实验操作流程：

试剂室温放置 27min，梯度稀释 p65 亚基标准品，排布酶标板空白、标准、大鼠核蛋白样本孔。

一步直接加样 100μL 标准品与预处理核蛋白样本入对应孔，空白孔补样本稀释液。

密封酶标板，37℃孵育 65min，特异性识别 NF-κB p65 亚基。

倒掉孔内液体，洗涤液注满每孔静置 25s，洗板 4 次，拍干板底洗涤液。

除空白孔外加入 HRP 酶标二抗 100μL，避光 37℃孵育 23min。

加入显色底物液 100μL，避光摇匀，显色 11min。

终止液终止反应，450nm 测定吸光值，对照标准曲线换算 p65 浓度。