大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法检测大鼠样本中HMGB-1含量，将大鼠HMGB-1单克隆抗体包被于酶标板，样本中HMGB-1抗原与包被抗体特异性结合，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗形成免疫复合物，经底物显色、终止反应后，酶标仪检测吸光度，吸光度大小与样本中HMGB-1浓度成正比，通过标准曲线即可计算样本抗原含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤10pg/mL

检测范围：25pg/mL - 800pg/mL

反应时间：总反应时长150分钟（样本温育90分钟、酶标二抗温育30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光冷藏，严禁冷冻，浓缩洗涤液室温保存，低温结晶可温水溶解后使用

有效期：未开封有效期6个月，开封后1个月内用完

显色系统：HRP催化TMB显色体系，硫酸终止液终止反应

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数拟合曲线，以标准品浓度梯度对应吸光度值绘制，R²≥0.990

特异性：特异性结合大鼠HMGB-1蛋白，与HMGB家族其他蛋白无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：组织样本需充分匀浆、离心取上清；避免样本中蛋白酶干扰检测；温育全程密封防止孔板液体蒸发
关键注意事项：

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异

所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）

避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用

洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果

显色过程需避光，避免阳光直射影响结果

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实验操作流程：

试剂室温平衡 30min，复溶 HMGB-1 冻干标准品，用样本稀释液配制 6 个浓度梯度标准品，划分酶标板孔类型。

一步法直接上样：标准孔加梯度标准品 100μL，待测孔加入大鼠组织匀浆上清 100μL，空白孔加纯稀释液。

密封酶标板，37℃恒温孵育 80min，完成固相抗体与 HMGB-1 抗原的特异性结合。

弃液洗板，每孔洗涤液浸润 40s 后弃去，重复洗板 6 次，充分洗去未结合杂蛋白。

全部检测孔加入酶标记抗体工作液 100μL，覆膜避光，37℃孵育 30min。

加入 TMB 显色底物混合液 100μL，避光轻柔摇匀，37℃显色 16min，直至标准品出现明显由深到浅蓝色梯度。

加入终止液终止显色，450nm 波长酶标仪读数，绘制标准曲线计算样本 HMGB-1 表达量。