大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒

竞争 ELISA 检测体系，微孔板包被 5-HT 抗原，样本内大鼠 5 羟色胺与固相抗原竞争结合酶标记特异性抗体，孵育洗板后显色读数，样本 5-HT 浓度越高则显色越浅，对照标准曲线计算体液、脑组织样本中 5-HT 含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.1ng/mL，可检测神经、血清微量5-HT指标

检测范围：0.2ng/mL - 20ng/mL

反应时间：总时长90分钟，37℃恒温孵育，样本孵育60分钟，二抗孵育30分钟

保存条件：2-8℃避光冷藏，标准品开封后分装-20℃保存

有效期：原装试剂盒6个月，分装标准品3个月有效

显色系统：高灵敏TMB显色系统，低背景高信噪比

检测波长：450nm检测，620nm参比校正

标准曲线绘制：6浓度梯度，四参数拟合，R²≥0.996

特异性：专一结合大鼠5羟色胺，与多巴胺、去甲肾上腺素等神经递质无交叉反应

重复性：板内CV≤4.8%，板间CV≤6.8%

注意事项：脑组织、血清样本需快速低温处理，防止5-HT降解；全程避光操作，避免光敏物质分解；上机检测前去除孔内气泡
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂室温平衡 25min，浓缩洗涤液稀释 20 倍，脑组织匀浆样本解冻混匀。

标准品稀释：5-HT 标准品复溶后倍比稀释 6 个梯度，设置空白对照。

加样孵育：各孔加 50μL 标准品、样本，酶结合物 50μL，37℃避光密封孵育 58min。

洗板操作：洗涤液浸泡 30s，拍干残液，洗板 5 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 13min。

终止读数：终止液混匀，8min 内读取 450nm 吸光值。

数据计算：标准曲线定量大鼠脑组织、血清 5 羟色胺含量。