人5-羟色胺(5-HT)elisa试剂盒

1. 基本原理

ELISA技术（酶联免疫吸附试验）：基于抗原-抗体特异性结合，通过酶标记物催化底物显色，测定吸光度（OD值）计算5-HT浓度。

竞争法：常见于小分子检测。样本中的5-HT与标记的5-HT竞争结合抗体，信号强度与5-HT浓度成反比。

 2. 主要组分

预包被板：96孔板（或48孔），包被抗5-HT抗体或捕获分子。

标准品：已知浓度的5-HT溶液，用于绘制标准曲线（通常0-1000 ng/mL或pg/mL范围）。

检测抗体：酶标记（如HRP、ALP）的5-HT抗体或二抗。

显色底物：TMB（显蓝色）或其他显色剂。

终止液（如硫酸）：终止反应，变黄色。

洗涤缓冲液：PBS或TBS含吐温-20。

样本稀释液：减少基质效应。

3. 适用样本

体液：血清、血浆（需抗凝剂如EDTA）、尿液、脑脊液。

组织：脑、肠道等组织匀浆（需预处理）。

细胞培养上清：神经细胞或肠嗜铬细胞分泌的5-HT。

5. 数据分析

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合标准曲线（四参数逻辑曲线等）。

根据样本OD值计算5-HT浓度，注意稀释倍数。

6. 灵敏度与特异性

检测限：通常1-10 pg/mL，不同品牌有差异。

交叉反应：需验证与类似结构分子（如5-HIAA、色氨酸）的交叉性。

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 4. 操作步骤（简化版）

样本准备：离心去除颗粒物，可能需要酸化提取（如用高氯酸）。

加样：标准品/样本加入对应孔，与酶标记物竞争结合抗体。

孵育：室温或37℃反应1-2小时。

洗涤：去除未结合物质。

显色：加入底物，避光反应15-30分钟。

终止：加终止液，测定450nm吸光度（参考波长570/630nm）。