黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒 新品

黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法)

分光法 50管

正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO or XOD)是体内核酸代谢中的一种重要酶，可以催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并能进一步催化黄嘌呤氧化为尿酸，同时产生过氧化氢以及超氧化物阴离子的一系列氧化反应，在包括人类在内的一些物种中的嘌呤分解代谢中起着重要作用。在人类及其它灵长类动物中，XO通常存在于血清、肺、肝脏和肠黏膜中。在啮齿类动物中，XO在大部分组织中均有表达。血液中XO的活性通常都很低。当感染甲型流感时，血清及肺部的XO活性会增加。当肝功能受损时，XO会大量释放到血液中，因此检测血液中XO水平被作为一个评估严重肝损伤(例如黄疸)的灵敏指标。XO也可能与痛风的发病机理相关，黄嘌呤氧化酶是尿酸形成的代谢途径，因此使用黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇用于治疗痛风。此外，研究显示抑制XO活性可缓解心血管疾病及慢性阻塞性肺疾病。

测定原理：

黄嘌呤在XO催化作用下产生的超氧化物阴离子(O2·–)，随后与WST类指示剂(Indicator)反应产生水溶性的甲臜染料(Formazan dye)。甲臜染料在450nm左右有最大吸收峰，通过测定450nm处的吸光度就可以非常灵敏地检测黄嘌呤氧化酶活性。如果在反应中加入黄嘌呤氧化酶抑制剂(Inhibitor)，甲臜染料的生成就会被抑制，甲臜的生成量与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。

试剂组成和配制：

1. 试剂二工作液：试剂二为固液混悬液，于4℃保存；使用桌面离心机瞬离使内容物沉底，并涡旋均匀，取用前需充分颠倒混匀，根据用量取0.5μL按照0.5μL：400μL的比例加入试剂一，现配现用，配制好后可在冰浴上暂时保存，1小时内酶活性基本稳定；

【强制校准约定】以上为推荐稀释比例。由于试剂二为混悬体系，批次间酶活存在差异，正式实验前必须通过预实验验证ΔA阴性，以 0.5~1.2 为合格标准，按需微调稀释比例；校准完成后的工作液方可用于批量样本检测。

2. 试剂三工作液：取适量的试剂三，按照1: 9的比例加入试剂一。配制好的试剂三工作液4℃或冰浴避光保存，当天可使用，但建议尽量现配现用；

3. 试剂四工作液：取适量的试剂四，按照1: 9的比例加入试剂一中。配制好的试剂四工作液4℃或冰浴避光保存，当天可使用，但建议尽量现配现用。

4. 试剂五：10μM Febuxostat（非布司他）阳性对照，可以根据需要，使用与待测抑制剂一样的溶剂稀释至所需浓度或一系列浓度梯度。

需自备仪器和用品：

天平、可见分光光度计、1mL比色皿、恒温水浴锅、烘干机/冻干机、研钵/打粉机。

抑制剂准备：

1、取适量待测定的抑制剂，用试剂一、超纯水、DMSO等适当的溶剂配制成适宜浓度的溶液，如果有必要可以配制成适当的浓度梯度待用。（抑制剂的稀释和配制建议使用同一种溶剂。）

2、若样品为新鲜组织，则需对样品进行烘干，使用研钵或打粉机研磨成粉末后按上述步骤操作。

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