快速内切酶EcoRI-abs60213

一、产品概述

二、产品信息

三、背景

建议的反应条件：
1× Cut  缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件：
80℃温育 20 min。
质量控制：
功能活性检测：
最适反应温度下，在 20 ul 反应体系中，1 ul EcoRI能够在 15 min 内完全消化 1 ug λDNA。
超长时间温育检测：
最适反应温度下，将 1 ulEcoRI 与 1 ug λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测：
最适反应温度下，使用10倍酶量的 EcoRI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测：
最适反应温度下，在20 μl通用Cut反应体系中将1 μl  EcoRI 与 1 μg超螺旋质粒DNA共同温育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
蓝白斑检测：
使用1 μl  EcoRI 消化含有lacZα 基因且仅在该基因上具有1个酶切位点的特定载体。将酶切产物重新连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，涂布在含有X-gal、IPTG和相应抗生素的LB平板培养基上生长。成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以正确表达，并生长出蓝色菌落；而因酶切末端降解等原因未能重新连接的产物将得到白色菌落。对于LightNing®系列限制酶而言，白色菌落的比例应当小于1%。

四、制备和贮存

五、产品特点

六、注意事项