快速内切酶AccI-新

一、产品概述

二、产品信息

        快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne  或 CutOne  Color  Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性， 支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。
        CutOne  Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne  Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10  bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
识别位点：
5‘...G T ↓ M K A C...3‘
3‘...C A K M ↑ T G...5‘
产品组成：
组分
规格
AccI
50 μl
10× CutOne Buffer
1 ml
10× CutOne Color Buffer
1 ml

三、背景

建议反应条件:
1 × CutOne 缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件：
80℃温育 20 min。
质量控制：
功能活性检测
37℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，1 μl AccI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测
37℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，将 1 μl AccI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测
37 ℃下，使用 10 倍酶量的 AccI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22 ℃ 下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。
蓝白斑检测
使用 1 μl AccI 消化含有 lacZ α 基因且仅在该基因上具有 1 个酶切位点的特定载体。将酶切产物重新连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，涂布在含有 X-gal、IPTG 和相应抗生素的 LB 平板培养基上生长。成功连接的 β - 半乳糖苷酶基因可以正确表达，并生长出蓝色菌落；而因酶切末端降解等原因未能重新连接的产物将得到白色菌落。对于限制酶而言，白色菌落的比例应当小于 1%。

四、制备和贮存

五、产品特点

六、注意事项