Reverse Transcriptase II-abs60071

单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系，Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性，可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性，保真度高于绝大多数高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。

本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增，一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量，如果以DNA样品为模板，需避免使用降解的DNA作为起始模板。 

产品特点：

高覆盖度：经过扩增后可达到95%以上的覆盖度。

高均一度：无偏好扩增，可实现全基因组的均一扩增。

高保真：具有很强的校正功能，保真度高。

高灵敏：可实现从单个细胞样本的全基因组扩增。
产品组分：

实验方法：

适用于以 1-1000 个新鲜配制的细胞样品作为模板，以保证起始基因组的完整性。

（1）将细胞用 PBS 洗涤三次。

（2）取一倍体积的细胞，加入一倍体积的 Cell Lysis Buffer，轻轻混匀（勿涡旋混匀）后置于冰上放置 10min。

（3）加入一倍体积的 Neutralization  Buffer，轻轻混匀，勿涡旋混匀。

（4）从上述混合液中取 3μl 样品，加入 7μl 无菌水，10μl Reaction Buffer。如果不进行后续反应，需冰上放置。

将 20μl 上 述 处 理 后 的 样 品 加 入 到 25μl GenomiPhi Buffer 中。

（5）加入 5μl GenomiPhi29 Enzyme，30℃反应3h。

（6）65℃，10min 失活 GenomiPhi29 Enzyme。

（7）扩增产物是高浓度基因组 DNA，需要将扩增产物用无菌水或者 TE 缓冲液进行稀释后进行下游实验。