中性转化酶(NI)测试盒

中性转化酶(NI)测试盒

产品介绍：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI)和中性转化酶（NI)两种类型。                          

NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。

测定原理：

NI催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

酶促分解反应：NI催化蔗糖分解为葡萄糖和果糖

比色法检测：利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖反应生成棕红色产物，在540nm波长下测定吸光度

活性计算：通过还原糖生成量计算NI活性，单位为U/g鲜重或U/mg蛋白

反应条件：最适pH为6.5-7.5，最适温度为30-37℃
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定