超氧阴离子测试盒

商品属性：

商品介绍：

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

测定原理：

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据A530值可以计算样品中O2－含量。

自备实验用品及仪器：

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
检测原理：

捕获反应原理：超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成亚硝酸盐（NO₂⁻），反应式为：NH₂OH + 2O₂⁻ + H⁺ → NO₂⁻ + H₂O₂ + H₂O

显色反应机制：NO₂⁻在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下，生成红色偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰

定量分析方法：根据A530值计算样品中O₂⁻含量，吸光度与O₂⁻浓度呈线性正相关

样本前处理：通过冰浴匀浆和低温离心提取样品中的O₂⁻，避免其在提取过程中被氧化
样本前处理方法：

血清/血浆样本

血清制备：室温自然凝固15-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，取上清液。

血浆制备：使用EDTA或肝素钠抗凝，采血后轻轻颠倒混匀，同上述条件离心取上清。

保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月，避免反复冻融。

组织样本

称取约0.1g组织，按1:9比例加入预冷的提取液（如0.1g组织+0.9mL提取液），冰浴匀浆。

10000转/分4℃离心10分钟，取上清液待测，剩余样本-20℃保存。

细胞样本

收集细胞沉淀，加入提取液（10^6个细胞/1mL提取液），吹打混匀后超声破碎（冰浴，功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）。

10000转/分4℃离心10分钟，取上清液待测。

尿液样本

取新鲜尿液，2000转/分离心10分钟，取上清液。

若尿液浑浊，需用0.22μm滤膜过滤后再检测。

公司正在出售的产品：

测定操作步骤：

比色法/COD-PAP法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500~520nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分溶解备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

试剂三 100 100

混匀后37℃水浴15min，记录500~520nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将FC标准品稀释成0、0.031、0.063、0.125、0.25、0.5、1μmol/L系列浓度，同样处理，测定500~520nm处的吸光值，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度