线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒

线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒

产品介绍：

线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。

测定原理：

复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

ATP 合成逆反应水解原理：复合体 Ⅴ（ATP 合酶）可催化 ATP 水解生成 ADP 与无机磷 Pi，通过测定水解速率表征复合体 Ⅴ 活性。

寡霉素抑制特异性原理：寡霉素特异性抑制 ATP 合酶水解活性；活性管‑寡霉素抑制管无机磷差值即为复合体 Ⅴ 产生的无机磷。

钼蓝无机磷显色定量原理：ATP 水解产生的无机磷与钼酸铵显色生成蓝色钼蓝复合物，比色测定 Pi 生成量。

初速度活力换算原理：控制反应时间在线性区间，结合线粒体蛋白浓度，换算出单位蛋白单位时间 ATP 水解活力，表征 ATP 合酶活性。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定