土壤荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶测试盒

土壤荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶测试盒

产品介绍：

FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。

测定原理

FDA是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm处有强吸收峰，通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

检测原理：

底物水解激活原理：荧光素二乙酸酯 (FDA) 本身无荧光；土壤水解酶可以水解 FDA 分子上的两个乙酸酯基团，释放出发光物质荧光素。

荧光信号产生原理：游离荧光素在碱性水溶液环境下产生黄绿色荧光；荧光强度与水解生成的荧光素产量呈正相关。

荧光定量检测原理：使用荧光分光光度计，在激发波长 490 nm、发射波长 520 nm 测定样品荧光强度；荧光素标准溶液制作标准曲线定量产物浓度。

灭活对照校正原理：高温灭活土壤作为空白对照，去除土壤自发荧光、非酶促水解带来的信号干扰；换算成单位土壤单位时间水解 FDA 的速率代表总水解酶活性。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定