土壤硝态氮测试盒

商品属性：

商品介绍：

硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。测定原理

在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

自备实验用品及仪器

蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
检测原理：

浸提分离原理：采用指定浸提剂（如氯化钾溶液）振荡浸提土壤样品，将土壤胶体吸附、水溶态的硝态氮离子释放至液相；离心过滤去除土壤固相残渣，得到澄清待测提取液。

还原显色原理（镉柱法 / 水杨酸法）：水杨酸‑硫酸体系下硝态氮与水杨酸反应生成硝基水杨酸，在碱性环境下生成黄色络合物；或者镉粒将硝酸根还原为亚硝酸根后再进行重氮偶联显色。

分光光度定量原理：黄色有色产物在 410 nm 波长有最大吸收；硝态氮标准溶液梯度显色建立标准曲线，待测液吸光度对照曲线求得提取液硝态氮浓度。

换算校正原理：扣除试剂空白吸光度，再根据浸提液体积、土壤取样质量、土壤含水率，换算得到土壤干基下硝态氮含量。
样本前处理方法：

细菌或培养细胞样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.05g组织，加入0.5mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/血浆样本

血清(浆)样品：直接检测

土壤样本取样：将样本风干、粉碎、过40目筛，然后称取约0.5g、加入2mL提取液（甲苯）提取：震荡提取20min，12000rpm，4℃，离心20min，取上清待测

公司正在出售的产品：

测定操作步骤：

比色法/分光光度法/微量法操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm/550nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用

试剂三：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

试剂三 100 100

混匀后37℃水浴10min，记录500nm/550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将PLD标准品稀释成0、1、2、3、4、5U/L系列浓度，同样处理，测定500nm/550nm处的吸光值，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度