土壤硝态氮测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

土壤硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质，测定具有重要意义：农业科学：评估土壤供氮能力，指导合理施肥，提高肥料利用率环境科学：监测土壤氮素流失，评估地下水污染风险生态学：研究氮循环过程，评估生态系统健康状况食品安全：控制农产品中硝酸盐含量，保障食品安全

测定原理

分光光度法

在酸性条件下，硝态氮与对氨基苯磺酸重氮化，再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，540nm波长下的吸光度与硝态氮含量成正比。反应式如下： NO3−+对氨基苯磺酸→酸性条件重氮化合物NO3−+对氨基苯磺酸酸性条件重氮化合物 重氮化合物+N-1-萘基乙二胺→紫红色偶氮化合物重氮化合物+N-1-萘基乙二胺→紫红色偶氮化合物

酚二磺酸比色法

土壤浸提液中的NO₃⁻—N在蒸干无水条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO₃⁻—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处比色测定。反应式如下： C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2NO2+H2OC6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2NO2+H2O

试剂盒组成

分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含提取液，用于土壤硝态氮的提取

试剂二 液体20mL×1瓶 含对氨基苯磺酸溶液，重氮化反应试剂

试剂三 液体20mL×1瓶 含N-1-萘基乙二胺溶液，偶合显色反应试剂

试剂四 液体25mL×1瓶 含缓冲液，提供反应环境

试剂五 粉剂×1支 含显色剂，需临用前加入2mL蒸馏水溶解

标准品 液体1mL×1支 含10μg/mL NO₃⁻—N标准品，用于建立标准曲线

酚二磺酸法试剂盒

组分 规格 作用说明

酚二磺酸试剂 液体50mL×1瓶 与硝态氮反应生成硝基酚二磺酸

CaSO₄·2H₂O 粉剂×1瓶 作为提取剂，提取土壤中的硝态氮

CaCO₃ 粉剂×1瓶 中和酸性，防止蒸干时有机质碳化

1:1 NH₄OH 液体50mL×1瓶 碱化，使硝基酚二磺酸变为黄色溶液

标准品 液体100mL×1瓶 含10μg/mL NO₃⁻—N标准品，用于建立标准曲线

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（540nm检测通道）、1mL玻璃比色皿、振荡仪

酚二磺酸法：分光光度计（400~425nm检测通道）、水浴锅、瓷蒸发皿

通用：电子天平（精度0.01g）、离心机、可调式移液器、研钵/组织匀浆器

现场检测：土壤硝态氮快速检测试纸、一次性采样管

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、比色管、试管架

自备试剂：蒸馏水/去离子水、浓盐酸、氢氧化钠

样本前处理方法

土壤样本采样：取5-10g新鲜土样，过2mm筛，去除石块和植物残体提取：称取0.1g土样，加入1mL蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，25℃离心：10000g离心10min，取上清待测保存：立即测定或-20℃保存

水样清洁水样：直接测定浑浊水样：用滤纸或0.45μm滤膜过滤后测定高浓度水样：用蒸馏水稀释后测定含悬浮物水样：离心后取上清液测定

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零工作液配制：将试剂二和试剂三按照1:1的比例混合，现配现用样本测定：

取样本0.5mL，加入工作液0.5mL，混匀，室温放置10min

在540nm波长下测定吸光度，以蒸馏水调零

空白对照：以蒸馏水代替样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL系列浓度，同样处理

标准曲线回归方程：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

酚二磺酸法操作样本提取：称取50g新鲜土样，加入0.5g CaSO₄·2H₂O和250mL水，振荡10min，过滤蒸干：吸取25-50mL清液于瓷蒸发皿中，加CaCO₃约0.05g，水浴蒸干显色：加入20mL水溶解蒸干物，缓慢加入1:1 NH₄OH至溶液呈微碱性，转入100mL容量瓶定容比色：在400~425nm波长下测定吸光度，以蒸馏水调零标准曲线绘制：将标准品稀释成0、1、2、5、10、15、20μg/mL系列浓度，同样处理

结果计算方法

分光光度法计算公式

硝态氮含量(mg/kg鲜重)=(ΔA−0.0073)÷0.0156W÷V样总硝态氮含量(mg/kg鲜重)=W÷V样总(ΔA−0.0073)÷0.0156

ΔA：样本吸光度值 - 空白吸光度值

W：样本质量（g）

V样总：样本总体积（mL）

酚二磺酸法计算公式

硝态氮含量(mg/kg)=C×V1×V3V2×m硝态氮含量(mg/kg)=V2×mC×V1×V3

C：从标准曲线上查得的硝态氮浓度（μg/mL）

V₁：提取液总体积（mL）

V₂：测定时所用提取液体积（mL）

V₃：定容体积（mL）

m：土壤质量（kg）

性能指标

指标 要求

线性范围 0~10μg/mL NO₃⁻—N，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤0.1μg/mL NO₃⁻—N

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免硝态氮被还原或淋失

土壤样本需自然风干后磨碎，避免高温和强酸强碱处理

水样需避免阳光直射，尽快测定

试剂使用：

酚二磺酸试剂需避光保存，避免吸湿

显色剂需临用前配制，避光保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

酚二磺酸法需严格控制无水条件，反应必须在蒸干状态下进行

反应温度需严格控制在25℃，反应时间1小时

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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