γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒

γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒

产品介绍：

GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

测定原理：

在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

自备仪器和用品：

冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。

检测原理：

肽键合成主反应原理：GCL 催化谷氨酸与半胱氨酸合成 γ‑谷氨酰半胱氨酸，消耗 ATP。

产物偶联检测原理：生成的 γ‑谷氨酰半胱氨酸通过显色试剂特异性反应生成有色复合物；或检测 ADP 生成量偶联 NADH 信号。

分光检测原理：在指定波长测定产物吸光度增量。

底物空白对照原理：不加谷氨酸底物的空白管扣除样本内源有色物质干扰，计算净合成速率。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定