NADP磷酸酶(NADPase)测试盒

NADP磷酸酶(NADPase)测试盒

产品介绍：

NADPase主要存在于植物组织中，是生物体内唯一催化NADP+降解为NAD+的酶，与NADK一起调控NAD和NADP之间的平衡。

测定原理：

NADPase能够催化NADP+水解为NAD+和无机磷的反应，通过测定无机磷的量来测定NADPase活性。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

检测原理：

水解酶促反应原理：NADPase 催化底物 NADP⁺水解脱去磷酸基团，生成 NAD⁺与游离无机磷 Pi。

磷显色反应原理：释放出的无机磷与钼酸铵‑还原剂反应生成蓝色磷钼蓝复合物。

终点比色检测原理：在 700nm 左右测定蓝色复合物吸光度；吸光度越高代表释放 Pi 越多、酶活性越高。

无机磷标准曲线原理：磷酸标准品绘制曲线，计算样本水解产生无机磷含量换算酶活。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定