单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

产品介绍：

MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理：

MDHAR 催化 NADH 还原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+没有。通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。

实验中所需仪器及设备：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和双蒸水

检测原理：

酶促主反应原理：MDHAR 利用 NADH 作为电子供体，将单脱氢抗坏血酸 (MDHA) 还原为抗坏血酸 (AsA)。

底物消耗反应原理：反应过程中 NADH 被氧化生成 NAD⁺，340 nm 下 NADH 吸光度随反应不断下降。

分光检测原理：连续监测 340 nm 波长吸光度下降速率，下降速度与 MDHAR 活性正相关。

空白校正计算原理：设置不加底物 MDHA 的空白管扣除样本自身 NADH 氧化本底，计算净酶活速率。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定