吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

产品介绍：

脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同，分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS， Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。

测定原理：

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷，通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

检测原理：

ATP 依赖的酶促合成反应：P5CS 催化谷氨酸，消耗 ATP、NADPH，生成 γ‑谷氨酰磷酸，再自发环化生成 Δ¹‑吡咯啉‑5‑羧酸 (P5C)。

P5C 与邻氨基苯甲醛显色：P5C 可与邻氨基苯甲醛酸性条件反应生成橙红色缩合产物。

分光光度检测：有色产物在 435 nm 处读取吸光度，吸光度与 P5C 生成量成正比。

酶活力换算：P5C 标准品绘制曲线，结合反应时间、样本蛋白量计算 P5CS 活力。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

比色法/COD-PAP法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500~520nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分溶解备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

试剂三 100 100

混匀后37℃水浴15min，记录500~520nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将FC标准品稀释成0、0.031、0.063、0.125、0.25、0.5、1μmol/L系列浓度，同样处理，测定500~520nm处的吸光值，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度