半胱氨酸(Cys)含量测试盒

半胱氨酸(Cys)含量测试盒

产品介绍：

蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

测定原理：

Cys还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过600nm吸光度，计算Cys含量。

自备仪器和用品：

低温离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、磷酸和蒸馏水。

检测原理：

巯基特异性显色反应：半胱氨酸分子含有游离‑SH 巯基，可与二硫键显色试剂（DTNB，Ellman 试剂）反应。

产物生成黄色 TNB⁻离子：DTNB 与巯基反应生成 2‑硝基‑5‑硫代苯甲酸根（TNB‑），水溶液呈亮黄色。

可见光比色读数：TNB‑在 412 nm 有最大吸收峰，吸光度与样本中游离半胱氨酸含量正相关。

标准曲线定量：半胱氨酸标准梯度制作曲线，扣除空白吸光度，换算样本 Cys 浓度。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定