氨基比林N去甲基化酶(AND)测试盒

商品属性：

商品介绍：

采用微量检测体系，基于AND酶催化氨基比林释放甲醛，通过Nash比色法测定甲醛含量来计算酶活性的试剂盒，AND属于细胞色素P450酶系，与药物去甲基化代谢密切相关，适用于微量样本的酶活分析。
检测原理：

酶催化脱甲基反应：AND（CYP450 亚型）催化氨基比林发生 N‑去甲基化，脱去甲基生成甲醛与剩余底物产物。

甲醛显色衍生反应：反应生成的甲醛与显色试剂（乙酰丙酮‑铵盐体系）在加热条件下生成黄色二氢‑卢剔啶衍生物。

分光光度定量检测：黄色产物在 415 nm 波长下有最大吸收，吸光度高低与生成甲醛量成正比，间接反映去甲基化酶活性。

标准曲线定量校正：用梯度甲醛标准溶液绘制标准曲线，将样本吸光度换算甲醛产量，再计算 AND 酶活力。
样本前处理方法：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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测定操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定