氨基比林-N-去甲基化酶(AND)测定试剂盒/微量法/48样

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)测定试剂盒/微量法/48样

测定意义：

细胞色素 P450 酶是一组在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物，具有重要作用的酶系。AND 作为 P450 酶系的重要一员，相当于 CYP3A4 亚型，与药物的去甲基化反应密切相关。

测定原理：

AND 催化氨基比林释放甲醛，通过 Nash 比色法测定甲醛含量，即可计算出 AND 活性。

自备仪器和用品：

普通离心机，超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、无水乙醇和冰。

AND 活性测定操作：
1.  分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。

3.  对照管：取 1 支 EP 管，加入 10μL 粗酶液，170μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 蒸馏水，混匀后置于水浴保温 30min；立即加入 35μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 35μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新的 EP 管，加入 100μL 上清液，100μL 试剂七，混匀后 60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 对照管。

4. 测定管：取 1 支 EP 管，加入 10μL 粗酶液，170μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 试剂四，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入 35μL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 35μL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取 1 支新 EP 管，加入 100μL 上清液，100μL 试剂七，混匀后60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 测定管。

5.   标准管：取 1 支 EP 管，加入 100μL 标准品，100μL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min ，于 412nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。