N-聚糖标签-W

北京生夏蛋白技术有限公司/北京华利世
朱凯15810267201（手机微信）

用于N-linked糖蛋白（包括抗体)经过PNGase F糖苷酶酶切后溶液中聚糖的超快速标记。 标记后的聚糖具有灵敏的荧光和质谱离子化特性。使用LC-FLR or LC-MS定量分析检测。该试剂独特的化学属性提供了更高的荧光定量和最高的质谱响应。

物理形态: 冻干粉
分子量: 427.1850Da
分子式： C21H25N5O5
标记的糖胺的质量偏移数： +C17H20N4O2=312.3663Da
Labeled N-Glycan(Da) = Released N-Glycan + Glycan Label Reagent - Reaction by-product(C4H5NO3, MW:115.0268) - H
聚糖标签溶解：55ul无水DMF溶解4.5mg N-聚糖标签-W即浓度=82ug/ul（现用现配）
无水DMF（HLS DMF001）：只用于聚糖标签干粉试剂的溶解和标记后样品的稀释
储存条件：冻干粉存储在-20℃冰箱，有效期见产品标签
保质期：冻干粉-20℃保质期24个月
适用范围: 每瓶4.5mg标签试剂溶解后可以标记5个酶切后的聚糖样品
推荐的N-聚糖标记SOP:
- 取 10ul 1.5 ug/ul mAb 脱盐样品加入0.6ml低蛋白吸附离心管
- 加 10ul 3% BT Surfactant w/5mM TCEP 变性还原缓冲液（50mM HEPES, pH=7.9) 混匀；
- 干浴95°C 加热3min； 然后冷却至室温
- 加 10μl 1.5 unit/ul rPNGase F糖苷酶 混匀， 干浴50°C 孵育15-30min。然后冷却至室温
- 加 10ul 82 ug/ul N-Glycan聚糖标签试剂混匀， 室温反应5min。
- 加 15ul 无水DMF； 加45ul 乙jing混匀。
- 标记后的N聚糖样品用于LC-FLR or LC-MS检测分析
质量控制｜Quality Control
产品组分：经LC色谱纯化， QEHF 超高分辨质谱分析， 试剂中N-聚糖标签：NHS化合物为3:2
标记效率：mAb抗体糖蛋白浓度为0.37ug/ul, N-聚糖浓度为20ug/ul标记PNGase F酶切15ug糖蛋白释放的N-聚糖， 标记效率99.5%
热稳定性: N-聚糖标签试剂在无水DMF室温下8小时稳定； 标记的糖胺在室温24小时稳定，质谱电离耐热320℃
化学不稳定性： 亲和试剂SDS, Tris, DTT, 胺，硫醇等浓度大于0.1mM不稳定。