猪蓝耳病毒经典型/高致病性猪蓝耳病毒/猪蓝耳病毒NADC株（PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC）核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒是一款三重分型核酸检测产品，可同时特异性检测猪蓝耳病毒经典型、高致病性及NADC株三类主流毒株核酸，覆盖当前国内猪场流行的主要蓝耳病毒变异株与经典毒株。针对当前猪蓝耳病毒毒株多样、混合感染频发、分型诊断难度大的行业痛点，产品实现一管多检，无需多次实验即可完成三类毒株的鉴别筛查，广泛应用于规模化猪场疫病精准诊断、疫病溯源、毒株流行监测、引种风险排查等场景。产品抗干扰能力强，可有效适配血清、组织、拭子等多种样本类型，检测结果精准可靠，为蓝耳病差异化防控、疫病净化及流行病学研究提供核心技术支撑。

基础原理：

三重单色多重荧光 RT-PCR 原理，三套引物探针分别识别三类毒株各自独有基因位点，三种探针标记差异化荧光基团，单一反应管内同步完成三种病毒 RNA 逆转录与扩增，依据荧光通道判读毒株类型。

采用 M-MLV 逆转录酶与高保真 DNA 聚合酶混合酶液，适配高突变 PRRSV 毒株模板，减少基因变异导致的扩增失效，拓宽毒株检出覆盖范围。

采用裂解结合核酸共沉淀纯化工艺，适配血清、肺组织、精液等多种猪源样本，去除脂类、多糖等强抑制物质，保证三类低载量毒株均可稳定检出。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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