植物内源基因tRNA-Leu核酸检测试剂盒

本试剂盒选取植物保守内源tRNA-Leu基因作为通用检测靶点，可广谱验证各类植物原料、粮油制品、果蔬加工品、饲料等样品中的植物源性基质成分。常用于植物类样品检测的内控对照，判定样品核酸提取有效性，排除假阴性结果，适配各类植物转基因检测、植物成分溯源、食品原料基质验证等实验场景。

基础原理：

以植物通用tRNA-Leu保守内源基因为靶标，设计广谱特异性引物探针，通过实时荧光PCR扩增该基因核酸，验证植物样本核酸提取质量。

tRNA-Leu基因是各类植物普遍存在的稳定内源基因，物种保守性高，可作为植物类样本核酸检测的通用内参基因，校验实验体系可靠性。

纯化植物样本核酸后，通过PCR扩增tRNA-Leu内源基因，根据荧光信号有无判定核酸提取是否成功，排除样本降解、提取失败导致的假阴性结果。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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