植物内源基因tRNA-Leu检测试剂盒(荧光PCR法)

商品属性：

植物内源基因tRNA-Leu检测试剂盒是一种基于实时荧光定量PCR技术的分子诊断产品。它并非用于检测外源病原，而是用于检测植物基因组中一个高度保守的亮氨酸转运RNA基因。

该试剂盒的核心用途是作为内参照，在转基因成分检测、物种鉴定等分子检测中，确认以下关键环节是否正常：

DNA提取是否成功。

PCR反应体系是否存在抑制物。

整个实验操作流程是否规范、有效。

简单来说，一个成功的tRNA-Leu检测结果是整个实验有效的“通行证”。

二、 检测原理

其原理与常规荧光PCR法完全一致，但目标分子是植物自身的保守基因。

DNA提取：从植物样本（叶片、种子、加工产品等）中提取总DNA。

PCR扩增与实时检测：

反应体系中包含一对针对植物tRNA-Leu基因高度保守区域设计的特异性引物和一个荧光标记探针。

如果样本中含有足量、高质量的可扩增植物DNA，探针会在PCR过程中被水解，释放出荧光信号。

实时荧光PCR仪监测整个过程的荧光强度变化。

结果判定：通过分析荧光信号达到设定阈值的循环数，来判断样本中是否存在内源基因，并评估DNA质量。

三、 试剂盒组成（通常包含）

DNA提取试剂（可选）：用于从各种植物样本中提取DNA。

tRNA-Leu PCR反应液：含有特异性引物、探针、dNTPs、缓冲液等。

热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：通常含有已知浓度的植物DNA（如大豆、玉米等常见作物的DNA）。

阴性对照：无核酸酶水。

四、 操作流程

样本制备与DNA提取：研磨植物组织，并使用合适的方法提取高质量DNA。

试剂配制：在PCR管中混合反应液、酶、待测DNA模板及阴阳性对照。

上机检测：

将反应管放入实时荧光PCR仪。

设置标准PCR程序：预变性（~95°C）→ 40-45个循环的 [变性 + 退火/延伸/荧光采集]。

结果分析：

实验有效性判断：

阳性对照：必须出现典型的S型扩增曲线，且Ct值在预期范围内。

阴性对照：必须无扩增曲线。

样本结果判定：

内参阳性：样本出现S型扩增曲线，且Ct值小于判定值（如Ct<30）。这证明：

样本确实含有植物成分。

DNA提取成功且质量良好。

PCR反应体系正常，无抑制物。

内参阴性：样本无扩增曲线。这表明：

要么样本中根本不含有植物成分（例如，纯淀粉）。

要么DNA提取完全失败。

要么PCR体系中存在强烈的抑制物。

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