志贺菌ipaH 基因(bp)常规PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒靶向志贺菌高度保守的ipaH毒力基因特定bp片段设计常规PCR扩增体系，可精准检测样本中致病性志贺菌的特异性基因片段。试剂盒靶点精准、特异性极强，可稳定扩增目标基因片段，区分志贺菌与其他肠道致病菌，检测结果精准、重复性好，适用于食品、水源、临床样本中志贺菌的精准定性检测，是细菌性痢疾溯源、食源性疾病防控的专用检测试剂。

基础原理：

裂解粪便样本志贺菌菌体，提纯基因组 DNA，去除肠道杂质干扰。

引物靶向 ipaH 毒力保守基因，扩增固定 bp 长度特征核酸片段。

电泳比对片段分子量，匹配设定 bp 条带即为致病性志贺菌阳性。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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