溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒 新品

该试剂盒依托PCR分子扩增技术，特异性靶向溶血性曼氏杆菌核心基因序列，可快速检测畜禽样本中的溶血性曼氏杆菌核酸。该菌是畜禽呼吸道疾病主要致病菌之一，本试剂盒灵敏度高、抗样本杂质干扰能力强，可适配肺组织、鼻腔分泌物等多种样本，检测结果精准可靠，适用于牛羊、家禽溶血性曼氏杆菌感染的快速诊断、耐药性辅助检测及疫病防控监测。

基础原理：

鼻拭子样本经核酸纯化柱富集溶血性曼氏杆菌 DNA，针对溶血素基因进行特异性扩增。

SYBR Green 荧光染料结合扩增双链 DNA，通过熔解温度峰值区分溶血性菌株扩增产物。

阳性对照使用灭活溶血性曼氏杆菌基因组 DNA，验证整套扩增体系酶活性正常。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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