溶血性曼氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

溶血性曼氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒为染料法荧光定量PCR检测试剂，专用于溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）的核酸定性或定量分析。采用SYBR Green等染料法检测原理，通过特异性引物扩增靶标DNA序列，结合实时荧光信号监测，实现高灵敏度、高特异性的检测。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

产品参数

规格：50T/盒（20μL反应体系/次）

检测方法：染料法荧光定量PCR

灵敏度：可达100拷贝/反应

线性范围：定量检测时覆盖至少5个数量级（如10^1–10^6拷贝/μL）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

运输条件：低温运输

产品特点

即开即用：预混优化试剂，仅需提供样品DNA模板。

高特异性：引物基于溶血性曼氏杆菌保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

灵敏度高：可检测低至数百拷贝的靶标DNA。

双重功能：支持定性与定量分析，标准曲线需用户自行稀释制备。

防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。

试剂盒组成

2×qPCR MagicMix：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（棕色管，500μL）。

荧光PCR专用模板稀释液（黄盖，1mL）。

溶血性曼氏杆菌特异性引物混合物（白盖，100μL）。

阳性对照：非传染性DNA片段（需按说明书稀释）。

使用方法

标准曲线制备（示例：10^1–10^6拷贝/μL）

标记6支离心管（1–6号），每管加入45μL模板稀释液。

取5μL阳性对照（初始浓度10^8拷贝/μL）加入6号管，震荡混匀，得到10^7拷贝/μL标准品。

依次10倍梯度稀释至10^1拷贝/μL（操作需在独立区域，避免污染）。

PCR反应体系（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR MagicMix | 10 |

| 引物混合物 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

扩增程序

预变性：95℃, 3分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40个循环；

溶解曲线分析（可选）：60–95℃，每0.5℃递增。

注意事项

实验分区操作，避免交叉污染。

阳性对照需单独稀释，严禁直接加入反应体系。

若需定量检测，需同步运行标准曲线。

废弃物需按生物安全规范处理。

质量控制

阴性对照：建议设置无模板对照（NTC）以监测污染。

重复性：建议每个样品至少重复2次。

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