支链淀粉含量检测试剂盒（分光光度50T/48S） 新品

支链淀粉含量检测试剂盒

分光光度法50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

支链淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响，对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。

测定原理：

支链淀粉和碘形成红紫色络合物，利用乙醇分开样本中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应，通过双波长比色法测定支链淀粉含量。

试剂组成和配制：

标准品（用于制作标准曲线）：粉剂1支，临用前用加2ml试剂三将标准品配置为10mg/mL母液（选做）。

需自备仪器和用品：

分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、1.5mLEP管、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

样本处理：

淀粉提取：称取0.01~0.02g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂三充分溶解，90℃水浴10min，冷却后待测。

测定步骤：

分别测定550nm和743nm处吸光值，ΔA测定=A550-A743，ΔA空白=A550-A743，空白管仅需测1-2次。

支链淀粉含量计算公式：

标准曲线为：y=0.1745x+0.04298，R2=0.9946，其中y为ΔA测定-ΔA空白，x为支链淀粉浓度(mg/mL)。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.04298)×V1]÷0.1745÷(V1×Cpr)=5.731×(ΔA测定-ΔA空白-0.04298) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.04298)×V1]÷0.1745÷(W×V1÷V2)=5.731×(ΔA测定-ΔA空白-0.04298)÷W

式中  V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项：

1、ΔA测定-ΔA空白线性范围为0.07-0.33，产物生成浓度检测范围为0.16-1.6mg/mL；如果ΔA测定-ΔA空白大于0.33，建议用试剂一稀释样本后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），如果ΔA测定-ΔA空白小于0.07，建议适当增加样本量。

2、反应后建议在20min内检测完成防止褪色。

3、提供的标准曲线及公式仅供参考，若有需要，可用提供的标准品自制标曲（计算公式及线性范围根据自制标准曲线需作对应修改），但需要注意，受仪器及个人操作影响，客户自制标准曲线可能与说明书中提供的标准曲线有差别。若无另外的实验要求，也可直接使用说明书所给标曲进行计算。

实验实例：

取0.005g叶片，加入1mL试剂一，按淀粉提取步骤处理，后按测定步骤操作，测得ΔA测定-ΔA空白分别为0.306、0.307、0.276，根据计算公式得：

支链淀粉(mg/g)=5.731×((ΔA测定-ΔA空白)–0.04298)/0.005=290.394(mg/g)