HotStart Bst4.2 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)无甘油

基本信息‌

‌英文名称‌：HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase (8U/ul, without glycerol)
作用机制：具有热启动特性，低温下酶活性被抑制，高温激活后表现出DNA聚合酶的链置换活性和反转录活性，可直接以RNA为模板进行cDNA合成和等温扩增，无甘油配方适合特殊实验体系。

适用样本：适用于RNA病毒的检测、RNA样本的基因分析等，样本包括临床样本、环境样本、动植物组织等含RNA的样本，尤其适合对特异性要求较高的实验。
产品概述
无甘油配方的热启动型Bst 4.2多功能聚合酶，同时具备DNA聚合酶活性和反转录酶活性，可直接以RNA或DNA为模板进行等温扩增。热启动特性使其在低温下处于抑制状态，升温后激活，有效减少非特异性扩增，保证反应的准确性。8U/ul的浓度保证了高效的催化能力，无甘油成分避免了对反应体系的干扰，适用于RNA病毒检测、复杂样本的等温扩增等实验。
产品特点
热启动双功能：热启动设计，同时具备DNA聚合酶和反转录酶活性

无甘油配方：避免甘油对反应体系的干扰，适用于特殊实验要求

高特异性：低温下无活性，有效减少非特异性扩增

恒温适配：65℃恒温反应，适用于等温扩增和RNA病毒检测
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。