农杆菌EHA105 新品

产品名称：农杆菌EHA105

英文名：Agrobacterium EHA105

规格：冻干粉；斜面；菌液；平板

货号：PJZ1544

作用：EHA105菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA) ，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏。

基本信息：

培养基  酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)

生长条件  28℃；24-48h；好氧

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  G－（红），杆菌

模式菌株  未知

操作步骤  ①准备上述平板2块；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入2块平板，200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

应用领域  EHA105菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA) ，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。

共享方式  公益性共享

产品描述：

农杆菌EHA105是根癌农杆菌的一个工程菌株，由野生型农杆菌改造而来，携带有Ti质粒的T-DNA转移系统，但缺失了致瘤基因，因此不会引起植物肿瘤。它是植物基因工程中最常用的转化载体之一，可将外源基因插入T-DNA区域，通过侵染植物伤口，将T-DNA整合到植物基因组中，实现外源基因的稳定表达。该菌需氧生长，适宜温度28℃，在LB培养基上生长良好，培养后形成圆形、凸起、不透明的灰白色菌落。农杆菌EHA105广泛应用于水稻、玉米、棉花、蔬菜等作物的转基因研究，培育抗虫、抗病、抗逆等优良品种。

培养及打管说明:

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。

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常见问题与解决方案:

污染问题

原因：操作不规范或培养基灭菌不彻底。

解决方案：严格无菌操作，定期检查培养基和实验设备。

菌种不生长

原因：菌种失活或培养条件不适宜。

解决方案：重新活化菌种，优化培养条件。

实验结果不稳定

原因：实验变量控制不严格或取样不均匀。

解决方案：规范实验操作，增加重复实验。