农杆菌EHA105化学感受态细胞

农杆菌EHA105化学感受态细胞

产品及特点本产品为 EHA105 农杆菌化学感受态细胞，为 C58 型背景，核基因中含有 筛选标签利福平抗性基因 rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功 能的琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)。此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pEHA105 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。本产品适用于 水稻、烟草等植物的转基因操作，经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率高达 10E3cfu/μg。 
规格及成分 成分 编号 十孔盒包装
EHA105 农杆菌感受态细胞 140383 10×100 μL
使用手册 140383sc 1 份

运输及保存 干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 质粒 DNA、液氮等

使用方法 转化前准备

1. 冰水浴和 37℃水浴。

2. 液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少 15 分钟。

转化方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。

2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每 100μL 感受态细胞加 1ug 质粒 DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置 10 分钟。

3. 将离心管置于液氮中速冻 5 分钟（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮）。

4. 迅速将离心管置于 37℃水浴静置中 5 分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置 5 分钟。

5. 加入 800 μL 无抗生素的 2×YT 或 LB 液体培养基，28-30℃振荡培养 2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。

6. 5000rpm 离心 1 分钟收菌，保留 100 μL 左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养 48-72 小时。