宽广伯克霍尔德氏菌 新品

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宽广伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）是伯克霍尔德氏菌属的革兰氏阴性杆菌，具单极或双极鞭毛，运动活泼，严格好氧。广泛分布于土壤、水体及医院环境中，能分解利用多种难降解有机污染物（如多环芳烃、农药），具有生物修复潜力，可用于治理环境污染，也是医院获得性感染的重要病原菌，可引起肺部感染、败血症、泌尿系统感染等，尤其对囊性纤维化患者和免疫低下人群风险较高，对多种抗生素具有耐药性，治疗难度大。
培养基  胰蛋白胨大豆培养基（英文名：TSA/TSB）：胰蛋白胨 17.0g，大豆胨 3.0g，氯化钠 5.0g，磷酸氢二钾 2.5g，葡萄糖 2.5g，琼脂 20.0g(液体培养基不含)，蒸馏水 1.0L，pH 7.3±0.2。121℃，15min灭菌。

生长条件  30℃；18-24h；好氧

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，表面光滑，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌，纯度：纯

模式菌株  no

操作步骤  ①准备1支含有5~10mL液体培养基的试管和2个平板；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL液体培养基打入冻干管，充分溶解后重新打回液体试管中，混匀；④吸取0.2mL菌悬液打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

复活步骤:

甘油管冻存菌株复活

超净工作台内，用无菌移液器吸取1-2ml适宜的液体培养基至无菌试管中。

用无菌枪头吸取0.1-0.2ml冻存菌株菌液，加入上述液体培养基中，轻轻吹打混匀。

试管封口后，置于对应温度的恒温摇床（细菌180-220rpm，真菌120-150rpm）中培养12-24小时，或静置培养箱中培养24-48小时，至培养基出现明显浑浊。

取少量复苏后的菌液，涂布于固体培养基平板上，倒置培养至单菌落长出，后续可进行纯化保存。

冻干管菌株复活

超净工作台内，用75%酒精擦拭冻干管外壁，火焰灼烧管口（注意避免灼伤），然后用无菌镊子轻轻敲开冻干管。

吸取0.5-1ml无菌液体培养基，缓慢加入冻干管中，轻轻振荡使冻干菌粉完全溶解。

将溶解后的菌液全部转移至装有5-10ml液体培养基的无菌三角瓶中，充分混匀。

三角瓶封口后，置于最适温度的摇床或培养箱中培养，培养时间根据菌株类型调整（细菌12-24小时，真菌24-72小时）。

待培养基浑浊后，取菌液涂布固体平板，进行单菌落分离纯化。

准备工作：

环境与器材消毒：

在生物安全柜或超净工作台中操作。提前打开紫外灯照射30分钟。

准备75%酒精喷洒双手和工作台面。

准备所需器材：无菌接种环、酒精灯、无菌吸管、涂布棒、试管架、打火机等。

培养基准备：

根据菌种类型选择合适的培养基（如营养琼脂、血平板、LB培养基等）。

将培养基从冰箱取出，恢复至室温或进行预热。

个人防护：

穿戴实验服、手套、口罩。需在生物安全柜中操作并佩戴护目镜。

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