伯克霍尔德氏菌属检测试剂盒

商品属性：

检测目标

特异性检测伯克霍尔德氏菌属的保守基因：

recA基因（属水平标记，覆盖B. cepacia复合群、B. pseudomallei等）

特异靶点（如B. pseudomallei的TTS1基因，B. mallei的fliP基因）

覆盖病原种：

临床高危种：类鼻疽伯克霍尔德菌（B. pseudomallei）、鼻疽伯克霍尔德菌（B. mallei）

环境/条件致病种：洋葱伯克霍尔德菌（B. cepacia）、泰国伯克霍尔德菌（B. thailandensis）

方法原理

多重荧光PCR：

recA-FAM探针（通用检测） + TTS1-HEX/fliP-Cy5探针（分型），内标（VIC）监控全程。

采用抗抑制剂聚合酶，适配土壤、脓液等高复杂样本。

适用样本

临床：血液（败血症）、痰液（肺部感染）、伤口分泌物

环境：土壤、水体（疫源地监测）

二、试剂盒组分与操作流程

1. 核心组分

组分  功能说明

PCR预混液  含热启动Taq酶、dUTP/UNG防污染系统

探针引物混合液  recA-FAM/TTS1-HEX/fliP-Cy5，内标（VIC标记）

阳性对照  灭活B. pseudomallei K96243株DNA

核酸提取试剂  磁珠法（含腐殖酸去除柱，适配环境样本）

2. 操作步骤

样本处理：

血液/痰液：蛋白酶K消化后提取DNA。

土壤：5g样本+10mL PBS震荡，离心富集菌体。

PCR程序（25μL体系）：

50℃ 2min（UNG）→ 95℃ 10min → [95℃ 15s → 60℃ 45s]×45 cycles

三、性能与结果解读

1. 关键参数

指标  性能要求

灵敏度  10拷贝/反应（纯DNA）

特异性  不与假单胞菌、军团菌交叉

检出限  102 CFU/mL（血液）或103 CFU/g（土壤）

2. 结果判读

属阳性：recA（FAM）Ct≤35 → 伯克霍尔德氏菌感染。

种鉴别：

TTS1（HEX）阳性 → B. pseudomallei

fliP（Cy5）阳性 → B. mallei

无效检测：内标（VIC）无信号 → 需排查抑制剂干扰。

四、注意事项

生物安全

B. pseudomallei/mallei需BSL-3实验室操作（中国《人间传染的病原微生物名录》二类病原）。

采样要求：

类鼻疽患者急性期血液（发热48小时内）检出率最高。

局限性：

不能区分定植与感染（需结合培养或临床指标）。

五、应用场景

临床诊断：

类鼻疽（东南亚/中国南部流行区）的快速确诊。

囊性纤维化患者洋葱伯克霍尔德菌感染筛查。

公共卫生：

疫源地（如稻田土壤）病原监测。

生物反恐（鼻疽伯克霍尔德菌为潜在生物战剂）。

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