大肠杆菌通用PCR检测试剂盒含致病性和非致病性 新品

本试剂盒依托大肠杆菌属通用保守基因扩增技术，可全面检测样本中致病性与非致病性大肠杆菌核酸，覆盖所有大肠杆菌菌株。试剂盒特异性强，不与其他肠道杆菌交叉干扰，适配食品、水体、临床粪便、畜禽样本，适用于各类场景下大肠杆菌的全面筛查、菌群检测和污染风险评估。

基础原理：

大肠杆菌属共有的 uidAβ 葡萄糖醛酸酶基因，食品、粪便细菌 DNA 广谱筛查全部大肠杆菌。

通用荧光探针靶向 16S rRNA 保守序列，qPCR 区分大肠杆菌与其他肠杆菌科细菌。

样本增菌液提取细菌 DNA，属通用引物扩增标记基因，仅判定大肠杆菌存在，不分致病型。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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